Modification of catalytic subunit of dna polymerase gamma by CRISPR/CAS9 genome editing technology
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Medikal Biyoteknoloji Tezli Yüksek Lisans Programı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: AYŞEGÜL EKMEKÇİOĞLU
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Meltem Müftüoğlu
Eş Danışman: Emre Deniz
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:DNA polymerase g (polg) ve MLH1 arasındaki sentetik lethal ilişki, MLH1 mutasyonuna sahip/hasarlı kanser hücrelerinin polg'nın küçük molekül inhibitörleri ile seçici olarak öldürülmesini sağlayabileceği için önemli bir yaklaşımdır. Polg mitokondriyel baz eksizyon tamir (BER) yolağında, tümör baskılayıcı protein MLH1 ise yanlış eşleme tamir (MMR) yolağında görev almaktadır. MMR, DNA replikasyonu sırasındaki tamir fonksiyonun yanı sıra temel tamir yolağı BER olan oksidatif DNA hasarının da tamirin de görev almaktadır. Seçici kanser tedavisi için polg inhibisyonu önemli bir hedeftir. Polg inhibitörleri aracılığıyla oluşan kanser hücrelerinin ölümlerinin diğer hücresel faaliyetleri etkilemeden sadece polg'nın hücredeki fonksiyonuna bağlı olarak mı gerçekleştiğini belirlemek için polg proteini susturulmuş hücrelere ihtiyaç duyulmaktadır. Bu nedenle, bu çalışma kapsamında MLH1 geni mutasyonu taşıyan (HCT116) ve mutasyona uğramamış MLH1 geni taşıyan (HCT116_Chr3) hücre hatlarında CRISPR/Cas9 genom düzenleme teknolojisi kullanılarak inhibe edilmiş/mutasyona uğratılmış polg proteini elde edilmesi amaçlanmıştır. Polg geninin susturulmasında, polg proteinin enzimatik aktiviteye sahip olan katalitik alt ünitesinin birinci ekzonu hedeflenmiştir. Polg proteininde CRISPR/Cas9 teknoloji kullanılarak erken stop kodonu yaratılarak gen susturulmuştur. Sonuç olarak, tekli hücre kolonilerinin üçünde polg geni susturulmuştur. Anahtar Kelimeler: BER, CRISPR/Cas9 teknolojisi, kanser, pol, sentetik letalite