Evaluation of Pichia pastoris as a Microbial Cell Factory for Production of Fungal Antimicrobial Proteins
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Medikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: Busel Özcan
Danışman: Günseli Bayram Akçapınar
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Antimikrobiyal direnç mikroorganizmaların neden olduğu enfeksiyonların etkili bir biçimde bertaraf edilememsinin en büyük nedenidir. Patojenik mikroorganizmalar antimicrobiyal ilaçlara karşı hızla direnç geliştirmekte ve bu durum global bir kriz haline gelmektedir. Günümüzde yaygın bir şekilde kullanılan bu ilaçların fikir, keşif gibi aşamalardan üretime kadar geçen süreçleri hem uzun hem de oldukça maliyetlidir. Bu sebeple, hem yüksek etkiye sahip hem de düşük maliyetli alternatiflere ihtiyaç duyulmaktadır. Fungal defensinler günümüz konvansiyonel tedavilerine alternatif olabilme potansiyeli olan aday peptitlerdir. Sistein bakımından zengin, katyonik ve fungusların savunma mekanizmaları tarafından salgılanan bu peptitler antimikrobiyal özelliğe sahiptir. Hidrofobinler de mantarlar tarafından salgılanan, hidrofobik aminoasitlerden oluşan, korunumlu sistein bölgelerine sahip küçük aday peptitlerdendir. Bu tez çalışması kapsamında, fizikokimyasal analiz sonuçlarına göre veritabanlarından seçilen ve daha önce karakterize edilmemiş üç defensin; F2T142, F2T142Mut, D6RKI7 ve bir hidrofobin, RodA, metilotrofik bir maya olan Pichia pastoris KM71H suşunda recombinant olarak üretilmiştir. Vektörde bulunan alfa sekresyon sinyali ile hücre dışına salgılanan peptidler biyolojik karakterizasyonları sonrasında antimikrobiyal, antifungal ve sitotoksisite bakımından fonksiyonel olarak değerlendirilmiştir. Elde edilen sonuçlara göre, recombinant üretim başarılı bir şekilde gerçekleşmiştir. Karakterizasyon sonrasında yapılan fonksiyonel testlerde F2T142 peptidinin Staphylococcus aureus ATCC 29213 suşuna karşı 240 µg/ml doz seviyesinde aktivitesi görülmüştür. Yine aynı peptidin, HepG2 karaciğer kanser hücreleri üzerinde yapılan toksisite çalışmalarında diğer peptidlere göre daha az toksik olduğu belirlenmiştir. D6RKI7 adayının da Candida albicans ATCC 90028 suşuna karşı aktivitesi görülmüş ancak yüksek toksisite göstermiştir. Anahtar Sözcükler: Antimikrobiyal peptitler, antimikrobiyal aktivite, fungal defensinler, hidrofobinler, Pichia pastoris.