Akademik Veri Yönetim Sistemi
31. Ulusal Biyofizik Kongresi, Adana, Türkiye, 9 - 12 Ekim 2019, ss.41, (Özet Bildiri)
Amaç: Günümüzde floresan etiketli proteinler (FP) ve
hücre yapı elemanlarına ve organellerine özgü floresan etiketli antikorlar
birçok hücre işlevinin anlaşılmasına olanak sağlamaktadır. Floresan protein-gen
füzyon ürünleri memeli ve diğer hücrelere uygun bir vektör (genellikle plazmit
ya da virüs) kullanılarak geçici ya da kalıcı olarak aktarılabilir. Gen füzyon
ürünleri daha sonra floresan teknolojilerinin kullanıldığı ( floresan
mikroskop, akış-sitometri, spektroflorometre gibi) cihazlar yardımı ile incelenebilir. Bu
projedeki amacımız otofaji ve mitofaji gibi hücresel süreçlerde rol oynayan
anahtar proteinler için çeşitli florokromları içeren bir plazmit kütüphanesi
oluşturmak ve bu proteinlerin hücre içi lokalizasyonlarını floresan yöntemler
kullanarak incelemektir.
Gereç ve Yöntemler: Hepatoma hücreleri (Hep3B) insan Atg3 memeli
mEmerald-ATG3-N-18 (Addgene, Plasmid #53999) ve YFP-Parkin (Addgene,
Plasmid#23955) ekspresyon plazmitleri ile Lipofektamin 3000 ya da Pei-Max
tranfeksiyon ajanları kullanılarak transfekte edildi. Transfeksiyon etkinliği
flow-sitometri ve floresan mikroskop kullanılarak izlendi.
Bulgular: Hep3B hücrelerinin Lipofektamin ya da Pei-Max ile
transfeksiyonu farklı oranlarda plazmit DNA’sı ve transfeksiyon ajanı
kullanılarak optimize edildi. Atg3 plazmidi kullanılarak yapılan
transfeksiyonlarda Lipofektamin’in Pei-max transfeksiyon ajanına göre daha
etkin olduğu hem flow sitometri hem de floresan mikroskopları kullanılarak
gösterildi.
Sonuç: Hepatoma hücrelerine hem Atg3 hem de YFP-Parkin
plazmitleri lipofektamin 3000 ile ortalama %70 oranında aktarılmıştır.
Florokrom işaretli bu plazmitleri içeren hücrelerde otofaji ve mitofaji
düzeylerinin ölçülebilmesi için bir hücre modeli oluşturulmuştur.
Bu çalışma Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar
Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Komisyonu (ABAPKO, Proje no:2018/03/08) tarafından
desteklenmiştir.