Akademik Veri Yönetim Sistemi
Turkiye parazitolojii dergisi, cilt.45, sa.2, ss.95-100, 2021 (Scopus)
Objective: In the present study, preliminary outcomes of the in vivo assessment of a Leishmania donovani/L. infantum hybrid isolated from a hospitalised patient with visceral leishmaniasis in Manisa and identified through analysis of the Leishmania-specific ITS-1, hsp70 and cpb gene regions are presented in comparison with reference strains of L. donovani and L. infantum. Methods: Three different study groups [(SG); n=16 mice each] and a control group (n=8 mice) were established with female Balb/C mice weighing 25-30 g. Reference L. donovani (MHOM/IN/1980/DD8), reference L. infantum (MHOM/TN/1980/IP1) and a L. donovani/L. infantum hybrid (MHOM/TR/2014/CBVL-LI/ LD), stored in liquid nitrogen, were thawed, cultured and incubated at 25 °C. A 15-μL dose of 1x108/mL promastigotes of three strains was applied to the tail veins of mice in the SG. After the mice were sacrificed, the liver and spleen tissues were removed and stored for immunological, immunohistochemical and pathological analyses. Results: The presence of infection in the liver and spleen tissues of mice was detected both by a specific enzyme-linked immunosorbent assay test and from the recovery of Leishmania promastigotes from liver and spleen tissues in NNN medium. However, Leishmania amastigotes were not observed in the touch biopsy smears of livers or spleens in either of the SGs. In addition, no evidence of tissue damage was identified in the SGs after immunohistochemical staining (with antibodies against IL-9, CD-117, MBP, CD163, CD4, CD8 and CD31). Conclusion: The obtained results show that hybrid Leishmania and reference L. donovani and L. infantum strains reached the liver and spleens of Balb/C mice in SGs but were of no pathological consequence. Yet, these three Leishmania isolates caused skin lesions when applied subcutaneously in Balb/C mice in another study. The findings presented in this study will be reassessed upon completion of the project, once the final results are obtained. Amaç: Bu çalışmada, Manisa’da tedavi gören bir viseral leishmaniasis hastasından izole edilen ve Leishmania’lara özgü ITS-1, hsp70 ve cpb gen bölgelerine yönelik analizlerle Leishmania donovani/L. infantum hibridi olduğu gösterilen etkenin karakterizasyonuna yönelik in vivo deneyler sunulmakta olup, ilk sonuçlar L. donovani ve L. infantum’un referans suşlarıyla karşılaştırılmaktadır. Yöntemler: Çalışma için, 25-30 gr ağırlığında dişi Balb/C fareler ile (her biri 16’şar fare içeren) üç farklı çalışma grubu (ÇG) ve 8 fareden oluşan bir kontrol grubu oluşturulmuştur. Sıvı azottaki referans L. donovani (MHOM/IN/1980/DD8), L. infantum (MHOM/TN/1980/IP1) suşlarla L. donovani/L. infantum hibridi (MHOM/TR/2014/CBVL-LI/LD) çözdürülüp kültive edilmiş ve 25 °C’de inkübe edilmiştir. Üç suşa ait 1x108/mL promastigot, 15 (mikrolitre; μL) dozda ÇG’deki farelerin kuyruk venlerine uygulanmıştır. Fareler sakrifiye edildikten sonra çıkarılan karaciğer ve dalak dokuları immünolojik, immünohistokimyasal ve patolojik testler için saklanmıştır. Bulgular: Farelerin karaciğer ve dalak dokularında enfeksiyon varlığı, hem özgül ELISA testiyle hem de NNN besiyerinde karaciğer ve dalak dokularından Leishmania promastigotlarının üretilmesiyle gösterilmiştir. Bununla birlikte, karaciğer ve dalaklardan hazırlanan “touch biyopsi” yaymaları incelendiğinde, hiçbir grupta Leishmania amastigotlarına rastlanmamıştır. Ayrıca VL’ye bağlı doku hasarını saptamak için yapılan immünohistokimyasal boyamalarda (IL-9, CD-117, anti-MBP, CD163, CD4, CD8 ve CD31) hiçbir grupta doku hasarına yönelik bir bulgu elde edilmemiştir. Sonuç: Edinilen sonuçlar, hibrid Leishmania ve referans L. donovani ve L. infantum suşlarının ÇG’deki Balb/C farelerinin karaciğer ve dalaklarına ulaştığını, ancak patolojik bir etki oluşmadığını göstermektedir. Bununla birlikte, bu üç Leishmania izolatının, başka bir çalışma için aynı tür farelerin deri altlarına uygulandığında deride lezyon oluşturduğu belirlenmiştir. Projeye ait deneyler tamamlanıp sonuçların elde edilmesinin ardından bu çalışmada sunulan bulgular yeniden değerlendirilecektir.